モウソウチク稈の成熟過程と木化ペルオキシダーゼの分布

Abstract

タケ類の稈は, 組織が複雑であるが, 細胞壁へのセルロースとリグニンの堆積が長期間にわたる点で, 細胞壁形成に関わる酵素の抽出と分析に好都合であると期待される。一方, ペルオキシダーゼ (PO) 基質のうち, リグニン堆積 (木化) に関与するPOを組織化学的にも検出できるとされているシリングアルダジン (SYR) について, その特異性を確認できれば, 木化現象を追跡するのに有用であろう。そこで, 本研究では, モウソウチク稈の各種細胞の壁肥厚と木化の進行の様子を光学顕微鏡で観察し, さらにその過程でみられるPO活性の変化を組織化学・生化学的に分析して, 木化に関与するPOのSYR特異性について検討した。その結果, 細胞壁の肥厚は, 網紋道管では4月に進行し, 維管束鞘の繊維細胞では4月から7月にかけて維管束側から外縁部へと進行した。基本組織柔細胞の壁肥厚は7月以降にはじまり10月には完了するとみてよいが, 肥厚しないものもあった。師部については, 壁肥厚・木化ともに認められなかった。その師部を除いて, 他の組織での木化は, それぞれ肥厚に約1ヶ月遅れて進行し完了した。SYRによる呈色は, 繊維や柔細胞の細胞壁が肥厚する時期, あるいはそれ以前から, それらの細胞間層に認められ, 二次壁が木化する時期になると反応が消失していた。抽出液のアイソザイム分析および分光分析から, 木化時期に1ヶ月程度先行して細胞壁結合性POの活性が高かった。これらの結果は, SYRを酸化するPOが木化に関与している可能性を示すが, そのPOはリグニン堆積全体, 特に二次壁のリグニン堆積よりも, 細胞間層などリグニン堆積の初期に関与するアイソザイムであると考えられる。

The relation between cell wall thickening and lignification were examined on various types of cells of bamboo culms being collected from the 15th internode every months from Spring (Table 1). Peroxidase (PO) activity was obsereved on the cells by histochemical methods using some substrates such as syringaldazine (SYR) which is expected to be specific to the lignification-PO. On the other hand, three types of POs, namely, cytoplasmic, lightly cell wall-bound and strongly cell wall-bound ones, which were extracted from the culms, were characterized by electrophoretic and spectrophotometric assays. According to the microscopic observation, the maturation of annular vessels has already completed in the April culm on which elongation of the observed position has stopped, whereas walls of reticulate vessels was thickened in April and lignified in May. The cell wall thickening of the bundle sheath fibers started from the inner (vascular) -side on April and proceeded to the outer (parenchyma) -side by the end of July. Increase of lignin content on each cell wall was shown to be delayed about one month from the thickening (Fig. 2a). PO activity with syringaldazine (SYR-PO) was stained clearly on the intercellular layer of fibers at the just-begining of cell wall thickening preceding one month to the initiation of lignification (Fig. 1b and 2a). While parenchyma cells of the ground tissue have thickened their wall from July to October, the lignification was delayed one month or more to the thickening, as well the case of fibers. SYR-PO was already detected on the April culm and decreased at the begining of the lignification. According to the electrophoretic and spectrophotometric assays, some PO isoenzymes seem to be related to the lignification of fibers and parenchyma cells, and the change of quantity of cell wall-bound POs was also consistent with the histochemical observation. Judging from these results, SYR-PO is strongly suggested to be participated in the lignification not on the secondary wall but on the intercellular layer.