<Original Articles>Generation of Monoclonal Antibodies that Distinguish between Mesotheliomas and Other Tumor of the Lung

Abstract

The accurate diagnosis of mesothelioma remains difficult despite advances of diagnostic technique . And specific monoclonal antibody (McAb) against mesothelioma have not been reported. In an attempt to develop mesothelioma specific McAb(s), spleen cells from a mouse immunized with isolated tumor cells were fused to a drug resistant mouse myeloma cell lines. Over 200 hybridomas were assayed for their preferential react ivity with mesothelioma cell lines or mesothelioma tumor biopsy tissues. Two monoclonal antibodies 2A3 and 4E1 were identified that bound 617 of the mesotheliomas, tested, but did not bind to the majority, 11/13 (for 2A3) and 12/13 (for 4E1 ), of other lung tumor types. Based upon western blot analysis of one and two-dimensional gels and upon the distribution pattern of the antibody recognized molecule in mesotheliomas and non-mesothelioma lung tumors, 2A3 binds to the cell adhesion molecule CD44. While the specificity of 4E1 has not yet been unequivocally established it appears to recognize a variant form of the CD44 molecule.

悪性中皮腫の診断は困難なことが多く, 特に, 肺の腺癌との鑑別は困難である. また悪性中皮腫に特異的なモノクローナル抗体もいまだ報告されていない. そこで, 悪性中皮腫に特異的モノクローナル抗体の作成を試みた. 悪性中皮腫の新鮮な手術標本から得られた腫瘍細胞で BALB/C マウスを免疫し, 脾細胞を採取した. 同脾細胞をマウスミエローマ細胞と融合し, ハイブリドーマを作成した. 200以上のハイブリドーマより, 2つのモノクローナル抗体 2A3 と 4E1 を1次スクリーニングによって選択し, Immunocytoadherence Assay を行った. 2A3, 4E1 ともに, 悪性中皮腫の継代培養細胞に対して陽性で, 新鮮腫瘍細胞浮遊液に対しては7例中6例が陽性であった. 初代培養細胞に対しては 2A3 が6例中4例, 4E1 が6例中5例に陽性を示した. 悪性中皮腫以外の腫瘍細胞に対しては大多数が陰性で, 2A3 は13例中2例, 4E1は13例中1例のみが陽性であった. 2A3 と 4E1 の標的分子の解析のために Western blot を行ったところ, これら2つの抗体が CD44 のstandard または variant form を認識している可能性が示唆された. さらに, 2次元の Western blot で 2A3 は抗 CD44 抗体と同じ分子量, 同じ等電点を持つ分子を認識していることが判明した.